不想挑晶體？原位晶體篩選，測試和結構解析方法

  X射線(xiàn)晶體衍射儀經(jīng)歷了快速發(fā)展的10年，我們的光源越來(lái)越強，探測器越來(lái)越快，數據處理越來(lái)越智能。儀器的進(jìn)步，大大提高了我們的晶體數據收集的效率和成功率，讓我們有更多的時(shí)間研究更深入的問(wèn)題。然而好的晶體永遠都是一位的尤其對于蛋白質(zhì)晶體來(lái)說(shuō)，獲得能夠衍射的晶體，仍然是主要的瓶頸之一。通常，為了檢驗蛋白質(zhì)晶體的衍射質(zhì)量，我們需要從晶體板上挑出晶體，加上防凍劑，冷凍，放到衍射儀上，然后測試。然而所有這些步驟都有可能損壞晶體。低溫晶體篩選不僅耗時(shí)耗力，而且我們沒(méi)有辦法避免這些操作過(guò)程對晶體衍射質(zhì)量的影響。

 

  幾年前，在同步輻射出現了原位晶體學(xué)的方法：快速，方便，可以直接在晶體生長(cháng)環(huán)境下研究晶體的衍射。原位的方法避免了低溫晶體學(xué)在晶體轉移過(guò)程中對晶體的損害。同樣在室內衍射儀上，Bruker D8 VENTURE-ISX STAGE同樣完美地實(shí)現了原位晶體篩選評估：

 

  1.切換方便，5分鐘內即可完成樣品臺的安裝和拆卸

  2.軟件控制，只需要鼠標點(diǎn)擊即可快速對整個(gè)晶體板的每個(gè)結晶空進(jìn)行查看

  3.自動(dòng)多樣品隊列衍射實(shí)驗

  4.快速表征晶胞參數，識別晶體以及后續的數據收集

 

 ▲ ISX Stage mounted on D8 VENTURE

 

實(shí)驗案例：GlucoseIsomerases晶體篩選和測試

 

儀器配置：D8VENTURE IµS 3.0，PHOTONII，ISX STAGE

樣品：GlucoseIsomerases結晶初篩48孔板，96個(gè)drop

總時(shí)間：1h（查看96個(gè)drop：30min；衍射28個(gè)晶體：30min；晶胞表征：10min）

 

1

晶體查看，挑選

 

 

 ▲ ISX Stage Software Control

 

2

確定晶體篩選隊列

 

 ▲ 挑選用于自動(dòng)篩選的晶體

 

3

自動(dòng)隊列晶體衍射實(shí)驗

 

 

 ▲ 30min，6個(gè)孔，28個(gè)晶體樣品篩選結果

 

4

數據收集

 

室溫下，原位對4顆晶體進(jìn)行數據收集，然后合并數據，使用MR解析結構。

 

 

 ▲ 原位常溫數據采集和結構解析